Uobičajeni problemi kada ultrazvučni homogenizator razbije Escherichia coli

E. coli eksprimira strani protein. Kada se sonicira, suspendira se u PBS-u koji sadrži 1% triton-X-100. Ultrazvučni efekat je bolji. Efekat 1% triton-X-100 je i dalje očigledan. Radovi, kao što su Streptomyces.

Bakterijska oborina direktno dodaje uzorak 1bufer, dodaje se 5 ml merkaptoetanola, miješa, centrifugira, kuha 10 minuta, izravno se opterećuje, koraci za bojenje i dekolorizaciju su sljedeći: staviti ljepilo u odgovarajuću količinu tekućine za bojenje u mikrovalnoj pećnici 1min Rastvor se zamenjuje velikom količinom Voda se može kuhati u mikrotalasnoj pećnici 10 minuta.

Posle ekspresije rekombinantnog proteina, ćelije su poremećene ultrazvučnim talasima, koristeći ledeno kupatilo, 400W, a 2S zaustavljen za 1S, ali je velika količina pene nastala u kratkom vremenu, što je uticalo na efikasnost drobljenja. I pb i tris baferi su bili isti, i konačno je drobljenje bilo nepotpuno. Ali moj ciljni protein je u ovim neprekinutim ćelijama, zbog čega nisam u mogućnosti da dobijem eksperimentalne rezultate.

Dozvolite mi da vam dam analizu zašto ova situacija i rešenje.

1. Mjehurići će biti generirani jer vaša pozicija sonde nije postavljena dobro, sonda mora biti blizu dna, oko 1 cm (obično sam 0,5 cm od dna), instrument će imati različite nivoe snage, ali možete promatrati stranica, postoje fluktuacije, ali nemojte biti previše agresivni.

2. Super 3S zaustavlja 10S, ultrazvuk oko 20 puta da vidi efekt

3. Obratite pažnju na položaj sirene. Ako niste u pravu, trebali biste ga podesiti na vrijeme. Osim toga, iz perspektive koncentracije bakterija, pokušati povećati volumen pri gnječenju, jačina ne smije prelaziti 60%.

4. Pokušajte 8S za Super 8S. Za neke bakterijske proteine, vaš metod je teško raspršiti toplotu, što dovodi do denaturacije proteina i stvaranja mjehurića. Najbolje je malo pauzirati. Ovo je češće u obliku inkluzivnih tijela.