Често постављана питања о поломљеним ћелијама

1. Е. цоли изражава стране протеине. Када се соницује, суспендује се у ПБС који садржи 1% тритон-Кс-100. Ефекат ултразвука је бољи. Ефекат 1% тритон-Кс-100 је и даље очигледан. Неке друге бактерије такође раде, као што су Стрептомицес. После експресије рекомбинантног протеина, ћелије су поремећене ултразвучним поремећајима ћелија, користећи ледено купатило, 400в и дробљене за 2с за 1с, али за кратко време је настала велика количина пене, што је утицало на дробљење. Оба пбс и трис бафера су била оваква. Да ли је фрагментација непотпуна, а циљни протеин је у овим небројеним ћелијама, шта треба да радим?

Анализа: Мехурић ће бити генерисан јер положај сонде није добро постављен; сонда мора бити близу дна, око 0,5-1 цм; снага ће се разликовати у зависности од инструмента, али ниво течности се може посматрати, постоји флуктуација, али не превише јака; можете одабрати ултразвучне ћелије Дробилица је сломљена за 3с за 10с и сломљена 20-30 пута. Такође треба напоменути положај рога. Ако је звук погрешан, треба га подесити на вријеме; с обзиром на концентрацију бактерија. Покушајте повећати волумен при дробљењу, снага Зуи не би требало да прелази 60%; покушајте да прекинете 8с за 8с, за неке бактеријске протеине, тешко је расипати протеин који изазива денатурирање протеина како би произвео мехуриће, које се може зауставити неколико дуже. Протеини пронађени у облику инклузионих тела.

2. Који су услови за ултразвучење Стрептомицес (ацтиномицетес)?

Аналитички: актиномицети припадају (Г + Ц) моларном проценту (мол%) Грам-позитивне (Еубацтериа) граничне групе на филогенетском стаблу прокариотског система, који има молекуларне и биолошке карактеристике јединствене за прокариоте. Међутим, у својим различитим групама, хемијски састав ћелијског зида варира у великој мери. У ултразвучном Е. цоли ултразвуку се користи 400В, а метод разбијања 5с за 5с је ефикасан, али се користи на Стрептомицесу, а нема ефекта због разлике у саставу ћелијског зида. Пре-спиннинг третман Стрептомицес (ацтиномицетес) је углавном конфигурисан до одређене концентрације суспензије бактерија. Специфични услови за дробљење коришћењем ултразвучног ћелијског поремећаја су: сакупљање бактерија у 24 х културном раствору на 5 000 р / мин током 5 мин да би се сакупљале ћелије; прање са пХ 7,5 На2ХПО -НаХ2ПО пуфером 3 пута, а затим Ћелије су формулисане у суспензију бактерије 1: 3 помоћу пуфера. Постављена у 40 мл пластичну епрувету; поставити велику пластичну епрувету у ледено купатило и срушити га са ултразвучним ћелијама (сонда снаге 200В, 1/2 ", затезање за 30с, прекидна 30с), растварање на 12000 р / мин Центрифуга при високој брзини од 30 мин, сакупљају ћелијски остаци и супернатант, а ћелије за прање се такође могу једнократ једном опрати помоћу претходно хлађеног соли или Трис-ХЦл при пХ 8. Поред тога, ултразвучна доза варира у великој мјери са количином узорка и бактерија. Снага може бити 400- 600в, дробљен за 5с, заустављен за 5с, ледено купатило и коначна концентрација од 1мМ ПМСФ. Да би се утврдио одговарајући ултразвучни интензитет и фреквенција, потребно је провјерити да ли су бактерије у потпуности прекинуте у било које вријеме.